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的液相色譜的五大系統介紹來(lái)了
點(diǎn)擊次數：3245 發(fā)布時(shí)間：2018-12-10
液相色譜的五大系統：
1、進(jìn)樣系統
進(jìn)樣系統分為手動(dòng)進(jìn)樣閥和自動(dòng)進(jìn)樣器。
手動(dòng)進(jìn)樣閥
對于手動(dòng)進(jìn)樣閥，使用過(guò)程中需要注意每個(gè)樣品進(jìn)樣完成后應對進(jìn)樣閥進(jìn)行清洗，防止殘留對下一個(gè)樣品分析的影響。
還需要注意進(jìn)樣方式，以20μL定量環(huán)為例，我們可以選擇*充滿(mǎn)定量管或部分充滿(mǎn)定量管。為了進(jìn)樣的重復性，選擇*充滿(mǎn)定量管進(jìn)樣方式時(shí)，需要注入定量環(huán)體積3倍以上的樣品;選擇部分充滿(mǎn)定量管進(jìn)樣方式時(shí)，進(jìn)樣體積應在定量管體積一半以下，即1-10μL。
自動(dòng)進(jìn)樣器
如果采用自動(dòng)進(jìn)樣器進(jìn)樣，首需要注射器里面沒(méi)有氣泡存在，否則影響進(jìn)樣量性;其次是樣品瓶里面有足夠的樣品，進(jìn)樣針能夠吸到樣品。
為了避免交叉污染需要定期對樣品瓶、蓋和墊進(jìn)行清洗。若自動(dòng)進(jìn)樣器長(cháng)時(shí)間不使用，應該注意：腐蝕性的流動(dòng)相或洗液(例如，堿性或酸性緩沖溶液)必須*從系統中置換出來(lái)。同時(shí)，為了避免細菌的生長(cháng)，應將一個(gè)樣品瓶中充滿(mǎn)甲醇，并重復幾次進(jìn)樣操作。
2、系統
泵按輸出液恒定的因素分恒壓泵和恒流泵。對液相色譜分析來(lái)說(shuō)，泵的流量穩定性更為重要，這是因為流速的變化會(huì )引起溶質(zhì)的保留值的變化，而保留值是色譜定性的主要依據之一。因此，恒流泵的應用更。
泵按工作方式分為氣動(dòng)泵和機械泵兩大類(lèi)。機械泵中又有螺旋傳動(dòng)注射泵、單活塞往復泵、雙活塞往復泵和往復式隔膜泵。
HPLC使用的壓泵應滿(mǎn)足下列條件：
a 流量恒定，無(wú)脈動(dòng)，并有較大的調節范圍（一般為1～10ml/min）；
b 能抗溶劑腐蝕；
c 有較的壓力；對一般分離，60×105Pa的壓力就滿(mǎn)足了，對分離，要求達到150～300×105Pa。
（1）往復式柱塞泵結構和原理
當柱塞推入缸體時(shí)，泵頭出口（上部）的單向閥打開(kāi)，同時(shí)，流動(dòng)相進(jìn)入的單向閥（下部）關(guān)閉，這時(shí)就輸出少量的流體。
反之，當柱塞向外拉時(shí)，流動(dòng)相入口的單向閥打開(kāi)，出口的單向閥同時(shí)關(guān)閉，一定量的流動(dòng)相就由其儲液器吸入缸體中。
這種泵的特點(diǎn)是不受整個(gè)色譜體系中其余部分阻力稍有變化的影響，連續供給恒定體積的流動(dòng)相。
（2）氣動(dòng)放大泵結構和原理
其工作原理是：壓力為p1的低壓氣體推動(dòng)大面積（SA ）活塞A，則在小面積（SB ）活塞B輸出壓力增大至p2的液體。壓力增大的倍數取決于A(yíng)和B兩活塞的面積比，如果A與B的面積之比為50：1 ，則壓力為5×105Pa的氣體就可得到壓力為250×105Pa的輸出液體。這是一種恒壓泵。
泵頭通常由兩部分組成--單向閥和密封圈-柱塞桿。單向閥一般由閥體\塑料\或陶瓷閥座和紅寶石球組成。在壓力的作用下寶石球離開(kāi)閥座，流動(dòng)相流過(guò)單向閥；反之，在反向力的作用下，寶石球回到閥座上，此時(shí)流動(dòng)相不再流過(guò)單向閥。
顯然寶石球與閥座之間的配合必須非常適合才能防止流動(dòng)相的泄漏。為了單向閥不發(fā)生泄漏，一些單向閥中安裝了兩套寶石球和閥座，也有一些單向閥是將寶石球用一個(gè)合適的彈簧壓在閥座上。
在不同的應用領(lǐng)域，單向閥閥體的材料有所不同，例如考慮生物兼容性的系統,單向閥的閥體往往采用金屬鈦，而不用不銹鋼。為了降低成本和減少維護費用，一些生產(chǎn)廠(chǎng)商還采用了可置換式的卡套式塑料單元件，當然其功能仍保持不變。
系統即是指壓恒流泵，其作用是能提供穩定的流速。
溶劑過(guò)濾頭：吸液過(guò)濾頭，或稱(chēng)沉子，主要作用是過(guò)濾流動(dòng)相中可能存在的顆粒性雜質(zhì)。長(cháng)時(shí)間使用后，雜質(zhì)有可能阻塞溶劑過(guò)濾頭上的過(guò)濾板孔隙；或長(cháng)時(shí)間使用緩沖液，過(guò)濾頭表面容易產(chǎn)生一層膜，阻礙流動(dòng)相正常通過(guò)。
嚴重時(shí)，即使是已聲過(guò)的溶劑，泵吸液時(shí)也會(huì )有氣泡在四氟管里產(chǎn)生，因此應經(jīng)常對過(guò)濾頭進(jìn)行清洗。清洗溶劑可以選擇乙醇或者30%稀硝酸溶液，正相系統需注意濾頭的烘干處理。
單向閥：?jiǎn)蜗蜷y的作用是確保液體向一個(gè)方向流動(dòng)，是壓恒流泵穩定的。日常使用過(guò)程中，可以通過(guò)觀(guān)察壓力的情況，初步判斷流量是否正常。
如果系統已經(jīng)平衡一段時(shí)間，壓力應該是穩定的。但如果壓力存在波動(dòng)，則表明流量不穩定；如果無(wú)壓力，則表明無(wú)流量。這兩種情況大多是因為單向閥里混入了氣泡或雜質(zhì)。
混入氣泡的情況，應把放空閥打開(kāi)，按沖洗鍵將里面的氣泡排出。單向閥混入雜質(zhì)的情況，須對其進(jìn)行清洗。清洗溶劑可以選擇乙醇，安裝時(shí)注意標記環(huán)的方向。
密封圈：密封圈是固定在柱塞桿上防止泵腔內的液體泄漏，是泵頭正常的關(guān)鍵部件。但柱塞桿和柱塞密封圈長(cháng)期使用會(huì )發(fā)生磨損，主要與流量、操作壓力和所使用的流動(dòng)相有關(guān)。
當使用含鹽的流動(dòng)相時(shí)，由于脫水或蒸發(fā)，可能形成鹽結晶，而泵運動(dòng)時(shí)鹽結晶會(huì )導致密封圈和柱塞桿的磨損。因此，每天實(shí)驗前和實(shí)驗后都需用純水沖洗一次密封圈(在柱塞密封圈和二級密封圈之間)，保持清洗管內有水以防止形成晶體，延長(cháng)柱塞桿和密封圈的使用壽命。
在線(xiàn)過(guò)濾器：為了防止由于流動(dòng)相雜質(zhì)微粒進(jìn)入色譜系統，泵在放空閥內安裝了在線(xiàn)過(guò)濾器，經(jīng)泵出口流出的液體通過(guò)在線(xiàn)過(guò)濾器，經(jīng)排空管流出的液體不通過(guò)在線(xiàn)過(guò)濾器。
儀器使用一定時(shí)間后，建議用戶(hù)清洗在線(xiàn)過(guò)濾器的燒結不銹鋼過(guò)濾片。用扳手卸下壓帽，將密封環(huán)和燒結不銹鋼過(guò)濾片一同取出清洗，清洗后按原位裝上。清洗溶劑可以選擇30%稀硝酸溶液，正相系統需注意濾頭的烘干處理。
3、分離系統
分離系統包括色譜柱、保護柱以及柱溫箱。
色譜柱：色譜柱是樣品分離的核心。色譜柱在使用前必須仔細閱讀說(shuō)明書(shū)，了解色譜柱使用的pH值范圍、溶劑耐受范圍、壓力范圍和維護方法等事項。色譜柱使用完后，需及時(shí)對色譜柱進(jìn)行沖洗。沖洗完成后，應該將色譜柱從儀器上拆下來(lái)，兩端用廠(chǎng)家配的堵頭密封后，保存在色譜柱盒里。
保護柱：保護柱的作用主要是防止吸附性的雜質(zhì)對色譜柱污染，從而延長(cháng)色譜柱的壽命。針對不同型號的色譜柱，應選擇相對應填料的保護柱。應注意柱芯也是有壽命的，應該定期進(jìn)行更換。
柱溫箱：色譜柱溫度變化，可能會(huì )導致保留時(shí)間的變化。為了避免這個(gè)問(wèn)題，建議使用柱溫箱。
4、檢測系統
液相色譜常用的檢測器有紫外檢測器、示差折光檢測器和熒光檢測器三種。
（1）紫外檢測器
該檢測器適用于對紫外光（或可見(jiàn)光）有吸收性能樣品的檢測。其特點(diǎn)是，使用面廣（如蛋白質(zhì)、核酸、氨基酸、核苷酸、多肽、激素等均可使用）、靈敏度（檢測下限為10-10g/ml）、線(xiàn)性范圍寬、對溫度和流速變化不敏感、可檢測梯度溶液洗脫的樣品。
（2）示差折光檢測器
凡具有與流動(dòng)相折光率不同的樣品組分，均可使用示差折光檢測器檢測。目前，糖類(lèi)化合物的檢測大多使用此檢測系統。這一系統通用性、操作簡(jiǎn)單，但靈敏度低（檢測下限為10-7g/ml），流動(dòng)相的變化會(huì )引起折光率的變化，因此，它既不適用于痕量分析，也不適用于梯度洗脫樣品的檢測。
（3）熒光檢測器
凡具有熒光的物質(zhì)，在一定條件下，其發(fā)射光的熒光度與物質(zhì)的濃度成正比。因此，這一檢測器只適用于具有熒光的有機化合物（如多環(huán)芳烴、氨基酸、胺類(lèi)、維生素和某些蛋白質(zhì)等）的測定，其靈敏度（檢測下限為10-12～10-14g/ml），痕量分析和梯度洗脫樣品的檢測均可采用。
HPLC常用的檢測器是紫外檢測器。在日常使用過(guò)程中紫外檢測器主要需要注意檢測池和氘燈的使用與維護。
檢測池：檢測池長(cháng)時(shí)間使用可能會(huì )造成污染，如果儀器的參比能量(REF ENERGY)正常，測量能量(SMPENERGY)偏低，可能為檢測池污染導致，可以對檢測池進(jìn)行清洗。
對檢測池零件的進(jìn)行清洗，一般采用約1：4的硝酸溶液聲清洗，分別用純水和甲醇溶液清洗，然后重組裝并將檢測池池體推進(jìn)池腔內，擰緊池板螺絲。注意組裝中，池玻璃及墊片一定要放正，以免壓碎池玻璃，造成檢測池泄漏。
氘燈：氘燈正常使用壽命可在1500小時(shí)以上。燈的使用壽命與檢測器的使用時(shí)間和開(kāi)啟頻率有關(guān)，因此使用過(guò)程中應盡量節省不必要的開(kāi)機時(shí)間，減少開(kāi)關(guān)頻率，以延長(cháng)氘燈的使用壽命。
如果地判斷出氘燈已經(jīng)不能點(diǎn)亮或能量太低，則需要更換的氘燈。在購買(mǎi)氘燈時(shí)，應注意咨詢(xún)和核對氘燈的型號與儀器型號是否匹配。更換到氘燈時(shí)，參照儀器說(shuō)明書(shū)中的相關(guān)內容，要注意氘燈連接線(xiàn)的位置順序。
5、數據處理系統
該系統可對測試數據進(jìn)行采集、貯存、顯示、打印和處理等操作，使樣品的分離、制備或鑒定工作能正確開(kāi)展。
